УКР  РУС  ENG  CHN 
Поиск:  
Направления деятельности
Роторный таблетпресс

Микробиологический мониторинг

Планирование программы микробиологического контроля является ключевым моментом работы в условиях чистой зоны или асептического фармацевтического производства. При невозможности проведения стерилизации на завершающем этапе производства, для уверенности в выпуске стерильного продукта производители препаратов для парентерального введения должны гарантировать соблюдение надежной программы контроля (мониторинга) состояния окружающей среды в зонах асептического производственного цикла.

 
 
Согласно требованиям Федерального Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA), мониторинг состояния окружающей среды должен быстро выявлять вероятные пути загрязнения, обеспечивая при этом возможность принятия превентивных мер, предупреждающих загрязнение продукта. Микробиологический мониторинг – один из наиболее важных видов лабораторного контроля процесса асептического производства, предоставляющий ключевую информацию о качестве окружающей среды асептического технологического процесса, позволяющий предотвратить выпуск потенциально загрязненного продукта, а также предупредить возможность такового загрязнения в будущем за счет выявления неблагоприятных тенденций.
В идеале программа мониторинга должна обеспечивать безотлагательную обратную связь, позволяющую быстро устранить любую обнаруженную проблему. Контроль состояния окружающей среды микробиологическими методами не может обеспечить этого ввиду наличия временного промежутка, требуемого для инкубации выявляемых микроорганизмов. Тем не менее, оценка микробиологического статуса чистой зоны является ценным способом эффективного контроля состояния производственной среды, который не позволяют осуществить другие методы. Этот способ также напоминает обслуживающему персоналу о важности соблюдения асептической техники.
Контроль за состоянием окружающей среды является только одной составляющей процесса обеспечения стерильных условий производства.
Другие его элементы включают:
§  хорошо спроектированный комплекс чистых помещений;
§  эффективную обработку воздуха;
§  уборку и дезинфекцию;
§  обучение персонала, призванное обеспечить строгое соблюдение им требований техники асептического процесса;
§  подбор соответствующей спецодежды для работы в чистой зоне; стерилизация материалов, предназначенных для использования в асептических условиях;
§  адекватный мониторинг других контролируемых параметров (таких как направление и скорость воздушного потока и давление воздуха в помещении) наряду с другими параметрами риска, имеющими отношение к рассматриваемой проблеме.
Источники микробного загрязнения
Существует много путей загрязнения чистой зоны. Наиболее вероятным источником микробного загрязнения в правильно спроектированной и контролируемой чистой зоне является персонал. Загрязнение может происходить в раздевалке, где сотрудники снимают свою личную одежду и надевают специальную стерильную одежду. Если процедура переодевания происходит с нарушениями, загрязнители могут проникать в чистую зону с поверхности спецодежды, перчаток, бахил и т.п. Одежда, предназначенная для ношения в чистой зоне, должна быть хорошо подогнана, не допуская проникновение частиц кожи за пределы костюма, и изготовлена из материала, не выделяющего волокна или частицы пыли. Персонал должен быть обучен асептической технике с тем, чтобы не допускать загрязнения стерильных перчаток, например, после прикосновения ими к лицу.
Другим возможным путем загрязнения микроорганизмами, которые не могут распространяться путем передачи через твердые поверхности, является вода. Согласно нормативным требованиям, в чистых зонах не должна находиться никакая вода; тем не менее, вода используется для уборки и является наиболее часто используемой технологической средой в производственном процессе.
 
Таблица 1

Предельные уровни микробного обсеменения для чистых зон, рекомендуемые Руководством Европейского Союза по
 GMP от 2003 г.
Классификация чистых зон При активном отборе проб воздуха КОЕ/м3 Свободная седиментация микроорганизмов из воздуха на чашки Петри – диаметр 90 мм, КОЕ/эа 4 ч экспозиции Контактные чашки, диаметр 55 мм, КОЕ/ чашку Отпечаток перчатки КОЕ/перчатку
Тип зоны А [включая локальные зоны для манипуляций высокого риска, например фасовки) <1 <1 <1 <1
Тип зоны В [фоновая среда для зон типа А в чистом помещении) 10 5 5 5
Тип зоны С [вспомогательные зоны например, помещения где готовятся асептические растворы для фильтрации) 100 50 25 -

 

Поэтому водосодержащие жидкости подлежат обязательной стерилизации перед их доставкой в зону розлива.
 Поскольку вода также используется и во вспомогательных зонах чистого помещения, по возможности следует использовать воду фармацевтической категории, что должно контролироваться и проверяться микробиологическими методами.
Считается, что материалы животного, растительного или природного минерального происхождения могут представлять больший риск микробного загрязнения, чем материалы, полученные путем химического синтеза.
Тем не менее, любые материалы, доставляемые в асептические производственные зоны, должны контролироваться для выявления признаков порчи. Особое внимание при этом следует уделять оценке микробиологического качества материала.
Причинами микробного загрязнения также могут быть нарушения воздушного потока, перемещения воздушных масс и неправильная эксплуатация высокоэффективных воздушных фильтров (HEPA).
В высокоэффективных воздушных фильтрах не должно быть нарушений герметизации в области крепления прокладок, рамок и ткани. При интенсивном перемещении воздушные массы могут подхватывать частицы слущенного эпидермиса или пыли, поэтому проект чистого помещения или зоны должен предусматривать такое направление воздушного потока, которое обеспечивает удаление загрязняющих частиц с продукта, из зоны расфасовки и других контролируемых зон. Надлежащий проект чистого помещения гарантирует однонаправленный воздушный поток без турбулентности или застойных зон.
Хотя общеизвестно, что ограждающие конструкции чистого помещения должны быть изготовлены из материалов, легко поддающихся отчистке, и предусматривать наличие закругленных поверхностей, особое внимание должно быть уделено областям, очистка и дезинфекция которых затруднена. Следует предусмотреть различные контрольные мероприятия с тем, чтобы минимизировать возможность загрязнения из этих источников.
Цель программы микробиологического мониторинга окружающей среды заключается в выявлении изменений показателя количества колониеобразующих единиц (КОЕ) или выявлении видов микроорганизмов, не укладывающихся в нормативные показатели.
Валидация рабочих характеристик питательных сред
Способности каждой используемой питательной среды к стимуляции микробного роста должны быть валидированы с учетом размеров и объема чашки для стандартного перечня микроорганизмов. Этот перечень должен включать нормативные микроорганизмы и культуры, высеянные из окружающей среды, а также представлять микроорганизмы, обнаруженные в производственных средах, включая грамположительные палочки, грамположительные кокки, мицелиальные грибки и грамотрицательные палочки.
Лаборатория должна обладать надежным методом для хранения и восстановления микроорганизмов.
Как только чашка с агаром инокулирована 10-100 КОЕ тестовых микроорганизмов, ее необходимо инкубировать при соответствующей температуре вплоть до 48 ч для бактерий и в течение 3-5 дней для грибков. Степень восстановления для неугнетенных микроорганизмов на основной среде должна составлять как минимум 70%, а на селективной среде по край¬ней мере 50%.
Минимальные стандартные показатели для чистых зон изложены в таких руководствах, как Фармакопея США (USP), руководство Европейского Союза (EU) от 2003 года по надлежащей производственной практике (GMP), (приложение 1, раздел «производство стерильных медицинских препаратов», см. таблицу 1) и рекомендациях австралийского Агентства по контролю качества лечебных средств (TGA) по производству стерильной продукции (2002 г).
Контролирующий орган определяет стандартные инструкции, которые должны соблюдаться на всех местах. Для каждого места должны быть установлены свои собственные уровни предельно допустимого и аварийного загрязнения, основанные на фактических данных за прошлый период. Они должны быть, по крайней мере, столь же строгими, как и предложенные в стандарте. Если объективные данные свидетельствуют о том, что местные уровни предельно допустимого и аварийного загрязнения должны быть более строгими, чем стандартные, контролирующий орган должен требовать принятия именно этих, более строгих уровней.
К микроорганизмам, которые наиболее часто могут быть выделены из сред асептического производства, относятся такие бактерии, колонизирующие кожу человека, как стафилококк и разновидности микрококка (грамположительные кокки). Кроме этого, обнаруживаются переносимые по воздуху бактериальные (например, виды Bacillus) и грибковые (например, виды Aspergillus или Penicillium) споры, реже — грамотрицательные кокки (например, виды Enterobacter и Burkholderia ) [2].
Представленные параметры, характеризующие как количество, так и вид микроорганизмов, способствуют лучшему общему представлению о микробных характеристиках среды в пределах производственной зоны и, при условии их регулярного контроля, могут отражать тенденции или изменения в установленной картине. Эта информация может использоваться для выявления зон с высоким риском микробного обсеменения и устранения его возможных путей.
Существует два основных метода забора проб воздуха для определения его микробного загрязнения: активный и пассивный. Активный отбор проб воздуха рассматривается как количественный метод, поскольку позволяет определить количество жизнеспособных микроорганизмов в определенном объеме воздуха (например, выраженное в КОЕ/м3).
Возможны различные способы активного отбора проб воздуха, включая использование фильтрующих и центрифужных импакторов, щелевого пробоотборника с агаром, вакуумных проб с различных поверхностей, метода фильтрации или жидкостных импинджеров, а также ручных пробоотборников.
В щелевом пробоотборнике чашка с агаром (обычно диаметром 140 мм) устанавливается на вращающийся стенд под воздухозаборником с четырьмя перпендикулярными щелями в нем. Воздух втягивается через эти щели насосом, присоединенным к устройству посредством гибкого шланга. При этом воздух со всеми содержащимися в нем частицами контактирует с поверхностью агара во вращающейся чашке. В комбинированных переносных устройствах насос находится в корпусе прибора. Чашка с агаром располагается в верхней части устройства, которое имеет перфорированную крышку, через отверстия в которой втягивается воздух. Воздух вместе со взвешенными в нем частицами контактирует с поверхностью агара перед выходом через заднюю стенку прибора.
Пассивный отбор проб воздуха осуществляется посредством расположения чашек Петри с агаром (см. рис. 1) в исследуемых зонах для экспонирования поверхности агара в течение установленного времени. В 1981 году Ассоциация производителей препаратов для парентерального введения (PDA) рекомендовала только 30-ти минутную экспозицию, однако позднее другие руководства советовали увеличить ее продолжительность до 4 часов. Смысл последнего предложения заключается в том, что большая продолжительность экспозиции повышает чувствительность метода. Тем не менее, следует заботиться о недопущении чрезмерного высыхания питательной среды, поскольку это может привести к замедлению скорости роста микроорганизмов.
Хотя пассивный метод забора воздушных проб не является количественным, использование седиментационных чашек сравнительно недорого, не требует никакого дополнительного оборудования или технических знаний, при их применении менее вероятно возникновение нарушений воздушного потока в чистой зоне, чем при активном отборе воздушных проб.
Независимо от того, какой из этих методов используется, при определении частоты отбора проб следует учитывать, что любое человеческое вмешательство вносит дополнительный риск. Производитель должен сопоставить преимущества, предоставляемые подобными вмешательствами, с нарушениями, вызванными их проведением.
Взятие проб с поверхностей
Другим важным моментом в рамках мониторинга окружающей среды в условиях асептического производства является регулярное взятие проб с поверхностей. Тем не менее, не рекомендуется осуществлять проверку критических поверхностей во время производственного процесса, так как это может увеличить риск загрязнения. Взятие проб с поверхностей осуществляют с помощью контактных чашек
 
Контактные чашки применяют для взятия проб с плоских поверхностей оборудования, ограждающих конструкций, рабочих столешниц и т.п. Эти специально разработанные чашки с агаром имеют куполообразную поверхность, которую осторожно прижимают к поверхности для переноса с нее искомых микроорганизмов на поверхность агара. Этот метод упоминается в фар-макопеях и считается количественным, поскольку он позволяет подсчитать число жизнеспособных микроорганизмов на определенной площади поверхности.
Для взятия проб с нелинейных или труднодоступных поверхностей прибегают к помощи тампонов. Это важно для проб с таких поверхностей, чистка которых может быть затруднена. Забор пробы с площади исследуемой поверхности осуществляют увлажненным тампоном. Затем этот тампон может быть использован для непосредственной инокуляции чашки Петри со средой или для погружения в растворитель или транспортную среду, которые затем используются для посева на чашку Петри.
Применение тампонов не упоминается в фармакопеях, однако они эффективны для взятия проб с поверхностей, недоступных для контактных чашек. При использовании любого из этих двух методов в состав питательных сред могут быть включены нейтрализующие компоненты, призванные противодействовать остаточным количествам антисептиков и моющих средств, которые могут оставаться на исследуемых поверхностях.
Эффективность асептической подготовки и принимаемых мер предосторожности может быть определена периодическим взятием проб с одежды персонала. Поверхность рук является потенциальным источником загрязнения, поэтому следует периодически осуществлять исследование рабочих перчаток, которое проводится путем прижатия всех пальцев рук, включая большие, к поверхности агара в чашке Петри; после этого перчатки заменяются чистым комплектом. В конце смены может быть протестирована и рабочая одежда с использованием контактных чашек или тампонов.
К питательным средам, наиболее часто используемым в процессе мониторинга окружающей среды, относятся триптоново-соевый агар (TSA) – универсальная среда, пригодная для культивирования широкого спектра микроорганизмов, а также декстрозный агар Сабуро (SDA) — идеальная среда для роста дрожжей и плесневых грибков. Другие используемые ключевые питательные среды включают: агар R2A (минимальная среда для тестирования водных проб); агар Мак-Конки (для бактерий группы кишечной палочки); агар XLD (для сальмонелл); цетримидный агар (для Pseudomonas aeruginosa); солевой агар с маннитом (для стафилококков); агар DCA (для кишечной флоры); агар Байрд-Паркера (для Staphylococcus aureus).
В настоящее время популярны готовые к использованию питательные среды фабричного изготовления, поскольку они обеспечивают унифицированные характеристики продукта. Предполагается контроль качества применяемых питательных сред со стороны фармацевтических компаний с использованием количественной методологи и низкого уровня инокулята. Поэтому предпочтительно, чтобы готовая к применению питательная среда была протестирована подобным образом и обеспечивалась соответствующей сопроводительной документацией.
Готовые питательные среды обычно выпускаются в чашках Петри диаметром 90 или 140 мм или в контактных чашках. Коммерчески доступен целый ряд стерилизованных облучением продуктов, пригодных для использования в чистых зонах. Существует также непроницаемая изолирующая наружная упаковка, которая позволяет оставлять чашки, применяемые для контроля окружающей среды, в локальной зоне в момент ее обработки стерилизующими средствами (например, паровой фазой перекиси водорода).
Планирование программы
При планировании эффективной программы контроля за состоянием окружающей среды необходимо обратить внимание на следующие моменты:
1.      Стратегия – письменный план действий, включающий указание времени и места забора проб, ориентированных на выявление новых потенциальных «слабых мест» в дополнение к уже установленным.
2.      Валидация методик – все методики, применяемые в программе, должны быть валидированы, включая: стабильность питательных сред; максимальное количество циклов авто-клавирования; рабочие характеристики питательных сред; эффективность нейтрализующих средств (подтверждение их способности инактивировать дезинфектант в концентрации, используемой для обработки производственного оборудования). Также может быть необходимым описание эталонной морфологии определенных микроорганизмов, поскольку внешний вид колоний, выращенных на облученных агаровых чашках, может от-личаться от морфологии аналогичных колоний на свежем агаре.
3.      Стандартные технологические процедуры – включая цель операции; частоту оценки; состав питательной среды; выбор контрольных штаммов; инкубацию; критерии для выпуска; документацию; результаты процесса технологической выбраковки.
4.      Культивирование/подготовка микробиологических культур – изоляты, выделенные из окружающей среды, часто бывают угнетены, поэтому для восстановления микроорганизмов требуется пересевание субкультуры с целью получения чистой культуры и производства достаточного количества материала для выполнения идентификации.
5.      Идентификация – все изоляты, полученные из рабочих зон типа A должны быть идентифицированы на уровне вида; изоляты из зон типа B с характерными морфологическими признаками должны быть идентифицированы на уровне вида; изоляты из зон типа С и D с характерными морфологическими признаками должны быть идентифицированы, если степень обсеменения ими превышает предельно допустимый уровень.
Если уровни обсеменения выходят за допустимые пределы, должна выполняться периодическая идентификация. Идентификация микроорганизмов может проводиться с использованием микробиологических или серологических методов, хотя более часто с этой целью прибегают к генетическим методикам, поскольку они не зависят от угнетенного состояния исследуемых микроорганизмов.
При наличии на месте всех элементов программы надлежащего контроля за состоянием окружающей среды производитель может быть уверен в соблюдении требований, предъявляемых к асептическому технологическому процессу.
Выход микробиологических показателей за допустимые пределы не обязательно свидетельствует о том, что продукт будет загрязнен, но при этом дает возможность исследовать производственный процесс для выявления зон с недостаточно эффективным контролем. Быстрое выявление негативных тенденций позволяет предотвратить появление потенциальных проблем в будущем. Невозможность действовать указанным образом может иметь самые серьезные последствия – о чем свидетельствуют 483 рапорта FDA о возможном изъятии некоторых препаратов из продажи.
 
Поделиться:
Главная  |  Компания  |  Вопрос-ответ  |  Новости компании  |  События компании  |  Вакансии  |  Контакты  |  Бесплатная юридическая консультация


Группа компаний "Аптека-95"
Украина, 61001, г. Харьков, ул. Юрьевская, 17
Тел./факс: (057) 714-06-03, 768-09-15,
 768-09-16,768-09-17
                                                     

Факс
-сервер
: 719-15-83

Карта проезда


СТОМАТОЛОГИЧЕСКАЯ КЛИНИКА!



P.S. "Ничто так не  дается дешево
                  и не ценится окружающими
                                        дорого, как улыбка"   Д.Карнеги